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大鯢低聚糖肽安全性的毒理學(xué)初步研究

文檔作者：姜萬(wàn)維1，余睿智2，曲敏2，趙前程2，王慶輝1，佟長(zhǎng)青2，李偉2 文檔來(lái)源： 1．大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院麻醉二科 2．大連海洋大學(xué)食品科學(xué)與212程學(xué)院		點(diǎn) 擊數(shù)：	更新時(shí)間： 2025年06月25日
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第8卷第3期
2017年3月
食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)
Journal of Food Safety and Quality
VjI．8 NO．3
Mat．．2017
大鯢低聚糖肽安全性的毒理學(xué)初步研究
姜萬(wàn)維1，余睿智2，曲敏2，趙前程2，王慶輝1，佟長(zhǎng)青2，李偉2+
(1．大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院麻醉二科，大連116001；2．大連海洋大學(xué)食品科學(xué)與212程學(xué)院，大連116023)
摘要：目的研究大鯢低聚糖肽的安全性。方法采用小鼠急性經(jīng)口毒性實(shí)驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)
和大鼠30 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)大鯢低聚糖肽的安全性。結(jié)果雌、雄性小鼠急性經(jīng)口在11764．7 mg／kg·BW
劑量時(shí)，未見(jiàn)毒性不良反應(yīng)，根據(jù)急性毒性劑量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，大鯢低聚糖肽屬于無(wú)毒級(jí)；大鯢低聚糖肽無(wú)致
小鼠骨髓細(xì)胞微核效應(yīng)，30 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)未見(jiàn)大鼠的生長(zhǎng)發(fā)育、生物化學(xué)指標(biāo)、臟器／體質(zhì)量比值比及病理學(xué)
變化。結(jié)論毒性實(shí)驗(yàn)未見(jiàn)大鯢低聚糖肽產(chǎn)生明顯毒副作用。
關(guān)鍵詞：大鯢；低聚糖肽；毒性；小鼠；大鼠
Toxicology of glycopeptides from Andrias davidianus
JIANG Wan—Weil，YU Rui—Zhi2，QU Min2，ZHAO Qian—Chen92，WANG Qing—Huil，
TONG Chang—Qin92，LI Wei28
(1．Second Anesthesia Department，Affiliated Zhongshan Hospital ofDalian University，Dalian 1 1 600 1，China；
2．College ofFood Science and Engineering，Dalian Ocean University，Dalian 1 1 6023，China)
ABSTRACT：Objective To investigate the safety of glycopeptides from Andrias davidianus．Methods The safety
of glycopeptides from A．davidianus was evaluated by the acute oral toxicity test of mice，the micronucleus
calculation of mouse bone marrow cells，and 30 d feeding test of rats．Results No toxicity was found when acute
oral toxicity dose was 1 1 764．7 mg／kg’BW in ICR mice(female and male)．Glycopeptides from A．davidianus could
be categorized as non-toxic according to the acute toxicity dose classification standard．The micronucleus calculation
of mouse bone marrow cells showed negative results．There were no adverse influences on growth and development，
biochemical indexes，organ—body ratios and histopathological changes of rats by 30 d feeding test．Conclusion
Toxicity test shows that glycopeptides from A．davidianus have no obvious poisonous effects．
KEY WORDS：Andrias davidianus；glycopeptides；toxicity；mice；rat
1 引言
大鯢似ndrias davidianus)屬兩棲綱、有尾目、隱鰓鯢
科，是我國(guó)特有的珍稀物種，屬國(guó)家二類保護(hù)動(dòng)物，主要
分布于長(zhǎng)江中上游、珠江中上游及漢水上游的溪流中‘11。
20世紀(jì)90年代以來(lái)，大鯢的人工養(yǎng)殖技術(shù)取得了重大突
破。目前，全國(guó)大鯢人工繁殖單位已達(dá)100余個(gè)，年人工
繁育大鯢幼苗達(dá)10余萬(wàn)尾，2015年大鯢養(yǎng)殖總量已接近
600萬(wàn)尾。因此，為了提高大鯢養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益，大鯢
的精深加工成為十分緊迫的任務(wù)【2】。大鯢皮膚表面具有豐
富的黏液腺和顆粒腺，這些腺體能分泌大鯢黏液[31。Qu
等【4]利用Aspergillus sp．酸性蛋白酶酶解大鯢體表黏液，
基金項(xiàng)目：大連海洋大學(xué)引進(jìn)人才及在職培養(yǎng)博士啟動(dòng)項(xiàng)N(1009142621
Fund：Supported by Doctoral Project ofDafian Ocean University(100914262)
+通訊作者：李偉，教授，主要研究方向?yàn)槭称房茖W(xué)。E-mail：aisingioro@hotmail．corn
+Corresponding author：LI Wei，Professor,College ofFood Science and Engineering，Dalian Ocean University,No．52，Heishijiao Street,Shahekou District，
Dalian 116023，China．E-mail：Nsnigiom@hotmail．corn
萬(wàn)方數(shù)據(jù)
918 食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)第8卷
獲得了分子量小于3500 Da的大鯢低聚糖肽。佟長(zhǎng)青等[5]
利用冷凍濃縮工藝獲得了大鯢低聚糖肽粉。曲敏等[6]利用
昆明種小鼠研究了不同劑量的大鯢低聚糖肽對(duì)小鼠免疫
功能的影響，發(fā)現(xiàn)它對(duì)小鼠體液免疫功能具有促進(jìn)作用。
進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)大鯢低聚糖肽還具有體外抗氧化活性、
對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用、抗疲勞作用、
保濕作用、抑菌、抗血小板聚集活性以及抗光老化作用
[7-12]。目前，大鯢低聚糖肽已經(jīng)成為一種新型的生物活性
物質(zhì)，在食品、藥品、化妝品以及科學(xué)研究中具有廣泛的
應(yīng)用。
來(lái)源于大鯢體表黏液的大鯢低聚糖肽，并不是傳統(tǒng)
的食用材料，也一直未見(jiàn)其安全性研究報(bào)道。本研究根據(jù)
中華人民共和國(guó)《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序》[13]設(shè)計(jì)
了大鯢低聚糖肽經(jīng)口小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞
微核效應(yīng)、大鼠30 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)【13-16]。本文對(duì)大鯢低聚糖
肽的安全性研究，為大鯢低聚糖肽的開(kāi)發(fā)利用提供了安
全性依據(jù)。
2材料與方法
2．1材料
大鯢體表黏液由張家界(中國(guó))金馳大鯢生物科技有限
公司提供。大鯢低聚糖肽按照Qu等[4】方法制備。
6～7周清潔級(jí)ICRzb鼠，體質(zhì)量為18～22 g，雌雄各半，
購(gòu)自大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心。SD大鼠，雌雄各半，
雌性動(dòng)物初始體重66—80 g，雄性動(dòng)物初始體重71-89 g，
購(gòu)于上海西普爾必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于12 h
黑暗、12 h光亮的塑料飼養(yǎng)箱內(nèi)飼養(yǎng)，室溫(23士2)℃，濕度
40％～60％，自由采食和飲水。動(dòng)物飼料購(gòu)自北京華阜康生
物科技有限公司，許可證號(hào)SCXK(京)2016-0011。實(shí)驗(yàn)動(dòng)
物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(遼)2008．0002，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可
證號(hào)SYXK(遼)2008．0002。
2．2實(shí)驗(yàn)方法
2．2．1急性經(jīng)1：7毒性實(shí)驗(yàn)
大鯢低聚糖肽以無(wú)菌水配制成0．1 g／mL。ICR小鼠20
只，雌雄各半，于第一次給藥前禁食12 h，不限制飲水。采
用灌胃途徑給藥。小鼠按20∥kg·BW給予無(wú)菌水配制的大
鯢低聚糖肽溶液。24 h內(nèi)給藥3次，每?jī)纱伍g隔8 h。給藥
結(jié)束后觀察7 d。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后全部小鼠脫頸處死，解剖檢查
心、肝、脾、肺、腎的病理變化。
2．2．2 小鼠骨髓細(xì)胞微核效應(yīng)
選IcR小鼠50只，隨機(jī)分成5組。設(shè)置3個(gè)劑量組，高
劑量設(shè)置為10 g／kg·BW，中劑量設(shè)置為5 g／kg’BW，低劑
量設(shè)置為2．5 g／kg·BW，按20 mL／kg·BW灌胃；實(shí)驗(yàn)同時(shí)
設(shè)置溶劑對(duì)照組、環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組(40 mg／kg’BW，腹
腔注射)。采用30 h給予受試物法，即兩次給予受試物間
隔24 h，末次給予受食物后6 h，脫頸處死動(dòng)物，制備骨髓
標(biāo)本。
取胸骨或股骨，止血鉗擠出骨髓液與玻片一端的小
牛血清混勻，常規(guī)涂片，涂片自然干燥后放人甲醇固定
5～10 min，保存或繼續(xù)后續(xù)染色。固定好的片子放入
Giemsa染色工作液中，染色10～15 min，立即用pH 6．8的
磷酸鹽緩沖液或蒸餾水沖洗、晾干。寫好標(biāo)簽，陰涼處保
存，或直接鏡檢。
閱片采用雙盲法，計(jì)數(shù)每只動(dòng)物200個(gè)紅細(xì)胞中的嗜
多染紅細(xì)胞(polychromatic erythrocyte，PCE)，計(jì)算其所占
比例；每只動(dòng)物觀察計(jì)數(shù)2000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞中微核細(xì)
胞數(shù)，微核發(fā)生率以千分率計(jì)。
2．2．3 30 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
取SD大鼠80只，雌雄各半，雌性動(dòng)物初始體重
66-80 g，雄性動(dòng)物初始體重71～89 g。設(shè)置3個(gè)劑量組，高
劑量設(shè)置為10 g／kg·BW，中劑量設(shè)置為5 g／kg-BW，低劑
量設(shè)置為2．5 g／kg·BW，按20 mL／kg·BW灌胃。另設(shè)置一個(gè)
對(duì)照組。連續(xù)喂養(yǎng)30 d。每天觀察大鼠情況。每周稱大鼠
體質(zhì)量和飼料質(zhì)量，計(jì)算增重、進(jìn)食量和食物利用率。實(shí)
驗(yàn)結(jié)束時(shí)對(duì)大鼠進(jìn)行血液學(xué)、肝功能指標(biāo)和肝、脾臟器系
數(shù)測(cè)定，并進(jìn)行病理學(xué)檢查【17]。
2．2．4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，數(shù)值以
(灶船I)表示。P<0．05為差異顯著。
3結(jié)果與分析
3,1急性經(jīng)口毒性實(shí)驗(yàn)
急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大鯢低聚糖肽整個(gè)急性毒
性實(shí)驗(yàn)過(guò)程中小鼠未出現(xiàn)死亡，未見(jiàn)毒性不良反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)
結(jié)束時(shí)剖檢結(jié)果也未見(jiàn)病理變化。為了灌胃，在滿足流動(dòng)
性前提下，配制最大藥物濃度0．1 g／mL。結(jié)果顯示大鯢低
聚糖肽對(duì)ICR種雌、雄小鼠的急性經(jīng)口毒性耐受劑量在
1 1764．7 mg／kg·BW時(shí)，未見(jiàn)毒性反應(yīng)。因此，大鯢低聚糖
肽屬于實(shí)際無(wú)毒級(jí)物質(zhì)。
3．2骨髓紅細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)
由表1可見(jiàn)，陽(yáng)性對(duì)照組與溶劑對(duì)照組相比有極顯
著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異儼<0．01)，陽(yáng)性對(duì)照成立；大鯢低聚糖肽
各劑量PCE百分比未少于溶劑對(duì)照組的20％，表明大鯢
低聚糖肽在實(shí)驗(yàn)劑量下無(wú)明顯細(xì)胞毒性；大鯢低聚糖肽
各劑量組的微核發(fā)生率與溶劑對(duì)照組相比，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)
差異(尸>0．05)，提示大鯢低聚糖肽對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞無(wú)致
微核作用。
3．3 30 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
3個(gè)劑量組，高劑量設(shè)置為10 g／(kg·BW·d)，中劑量
萬(wàn)方數(shù)據(jù)
第3期姜萬(wàn)維，等：大鯢低聚糖肽安全性的毒理學(xué)初步研究919
設(shè)置為5 g／(kg’BW·d)，低劑量設(shè)置為2．5 g／(kg·BW·d)，
相當(dāng)于人體(60 kg體重)每天吃1851．85、925．93、277．78
g。各劑量組大鼠喂養(yǎng)過(guò)程中進(jìn)食、活動(dòng)均正常，生長(zhǎng)發(fā)
育良好，無(wú)中毒及死亡現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大鼠體質(zhì)
量、增重、進(jìn)食量和食物利用率與陰性對(duì)照比較，差異
無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>O．05)(表2)。各劑量組的血液學(xué)指標(biāo)、
功能指標(biāo)和肝、脾臟器系數(shù)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義
(P>0．05)(表3、表4與表5)。解剖及病理檢查，未見(jiàn)有
異常及病理學(xué)改變。這表明，大鯢低聚糖肽對(duì)大鼠無(wú)損
害作用。
表1 大鯢低聚糖肽對(duì)小鼠骨髓微核發(fā)生率的影響r賈．4-SD)
Table 1 Effect of glycopeptides from A．davidianuson on micronacieas rate of polychromatic erythrocytes in mice r賈4-so)
t+：與溶劑對(duì)照組相比，P<0．01。
表2大鯢低聚糖肽對(duì)大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)和食物利用率的影響f賈4-so)
Table 2 Effect of glycopeptides from A．davidianuson on growth of body weight and food utilization rate in rats(賈-4-SD)
萬(wàn)方數(shù)據(jù)
920 食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)第8卷
表4大鯢低聚糖肽對(duì)大鼠肝功能的影響(賈4-SD)
Table 4 Effect of glycopeptides from A．davidianus on rat liver function in rats(X．4-SD)
表5大鯢低聚糖肽對(duì)大鼠肝臟及脾臟重量的影響(賈士SD)
Table 5 Effect of glycopeptides from A．davidianus on liver and spleen weight in rats(X．4-SD)
萬(wàn)方數(shù)據(jù)
第3期姜萬(wàn)維，等：大鯢低聚糖肽安全性的毒理學(xué)初步研究921
4結(jié)論與討論
大鯢低聚糖肽通過(guò)利用Aspergillus sp．酸性蛋白酶酶
解大鯢體表黏液制剁41。大鯢低聚糖肽的分子量低于3．5
kDa，其成分中總蛋白含量為80．01％，總糖含量為15．15％，
總糖中含有鹽酸氨基葡萄糖最高、半乳糖醛酸、葡萄糖醛
酸和唾液酸。氨基酸分析結(jié)果表明，大鯢低聚糖肽中所含
有18種氨基酸，除色氨酸未測(cè)出外，人體其它7種必需氨
基酸的含量較高，其中蘇氨酸(Thr)含量最為豐富，高達(dá)
13．1％【6】。同時(shí)，大鯢低聚糖肽具有多種多樣的生物活性。
因此，大鯢低聚糖肽具有在食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域的潛在的應(yīng)
用價(jià)值。
為了確保大鯢低聚糖肽的食用安全性，根據(jù)中華人
民共和國(guó)《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序》的規(guī)定，考察了
大鯢低聚糖肽經(jīng)口小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核
效應(yīng)、大鼠30 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。大鯢低聚糖肽經(jīng)口小鼠急性毒
性實(shí)驗(yàn)以及小鼠亞急性毒性實(shí)驗(yàn)表明大鯢低聚糖肽屬于無(wú)
毒級(jí)。小鼠骨髓細(xì)胞微核效應(yīng)、大鼠30 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)以及解
剖及病理檢查均未見(jiàn)異常。因此，在本研究的劑量范圍內(nèi)
大鯢低聚糖肽毒理學(xué)是安全的，可以進(jìn)一步開(kāi)發(fā)大鯢低聚
糖肽在食品及藥品領(lǐng)域的應(yīng)用。
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(責(zé)任編輯：楊翠娜)
萬(wàn)方數(shù)據(jù)
922 食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)第8卷
作者簡(jiǎn)介
兩姜萬(wàn)維'主刪幣，主要研究方向?yàn)?
2一’ 麻醉學(xué)。
籬參’I E-mail：13604941935@163．com
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李偉，博士，教授，主要研究方向
為食品科學(xué)。
E—mail：aisingioro@hotmail．corn
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《食品貯藏保鮮與品質(zhì)控制專題》征稿函
食品主要來(lái)源于農(nóng)業(yè)、林業(yè)、水產(chǎn)業(yè)、養(yǎng)殖業(yè)，食品貯藏保鮮與加工是這些產(chǎn)業(yè)體系的延伸，食品的貯
藏保鮮與品質(zhì)控制有利于發(fā)展農(nóng)村經(jīng)濟(jì)，改善人民的膳食結(jié)構(gòu)和營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)，提高人們的生活和健康水平，保
持社會(huì)穩(wěn)定。
鑒于此，本刊特別策劃了“食品貯藏保鮮與品質(zhì)控制專題”專題，由大連海洋大學(xué)食品學(xué)院趙前程院長(zhǎng)擔(dān)
任專題主編，圍繞(1)果蔬、糧油、肉制品和水產(chǎn)品等食品保鮮的新工藝開(kāi)發(fā)與應(yīng)用；(2)柵欄技術(shù)、生物酶技
術(shù)、可食性包裝膜、超高壓、輻照、冰溫等新型保鮮技術(shù)在食品殺菌與保鮮方面的研究與應(yīng)用；(3)食品貯藏、
抑菌保鮮機(jī)制分析；(4)食品保鮮包裝容器／材料、食品流通中的保鮮技術(shù)；(5)食品衛(wèi)生質(zhì)量控制和檢測(cè)方法等
或您認(rèn)為本領(lǐng)域有意義的問(wèn)題進(jìn)行論述，計(jì)劃在2017年6月份出版。
鑒于您在該領(lǐng)域的成就，趙前程院長(zhǎng)和主編吳永寧研究員特邀請(qǐng)您為本專題撰寫稿件，綜述、研究論文、
研究簡(jiǎn)報(bào)均可，以期進(jìn)一步提升該專題的學(xué)術(shù)質(zhì)量和影響力。請(qǐng)?jiān)?017年4月30日前通過(guò)網(wǎng)站或Email投
稿。我們將快速處理并經(jīng)審稿合格后優(yōu)先發(fā)表。
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《食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)》編輯部
龠蠢恩

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