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酶聯(lián)免疫吸附法在食品安全性指標(biāo)檢測中的研究進(jìn)展

文檔作者：馮敏1, 2 李亞楠1, 2 高麗霞1, 2, 黃登宇2, 3 文檔來源： 1. 山西大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 2. 山西大學(xué)食品藥品快速檢測中心 3. 山西省食品藥品監(jiān)督管理局,		點(diǎn) 擊數(shù)：	更新時(shí)間： 2025年06月30日
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第7 卷 第10 期 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào) Vol. 7 No. 10
2016 年10 月 Journal of Food Safety and Quality Oct. , 2016
*通訊作者: 黃登宇, 副教授, 主要研究方向?yàn)槭称沸l(wèi)生檢測。E-mail: Huangdy1110@126.com
*Corresponding author: HUANG Deng-Yu, Associate Professor, Shanxi University &amp;amp; Shanxi Food and Drug Administration, No.85, Longcheng
Avenue, Xiaodian District, Taiyuan 030006, China. E-mail: Huangdy1110@126.com
酶聯(lián)免疫吸附法在食品安全性指標(biāo)檢測中的
研究進(jìn)展
馮 敏1, 2, 李亞楠1, 2, 高麗霞1, 2, 黃登宇2, 3*
(1. 山西大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院, 太原 030006; 2. 山西大學(xué)食品藥品快速檢測中心, 太原 030006;
3. 山西省食品藥品監(jiān)督管理局, 太原 030006)
摘要: 隨著我國社會(huì)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展和人們生活水平的提高, 食品安全問題日益成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。酶聯(lián)
免疫吸附法是在免疫學(xué)和細(xì)胞工程學(xué)基礎(chǔ)上發(fā)展的一種微量檢測技術(shù), 具有操作簡便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。本文
總結(jié)了酶聯(lián)免疫吸附法在農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、致病微生物、生物毒素、非法添加的非食用物質(zhì)、重金屬、
過敏原和轉(zhuǎn)基因食品等檢測中的研究進(jìn)展, 評價(jià)了該檢測方法的優(yōu)缺點(diǎn), 并對其未來的發(fā)展方向進(jìn)行了展望
和建議。
關(guān)鍵詞: 酶聯(lián)免疫吸附法; 抗原; 抗體; 食品安全
Research progress of enzyme-linked immunosorbent assay in food safety
indices detection
FENG Min1, 2, LI Ya-Nan1, 2, GAO Li-Xia1, 2, HUANG Deng-Yu2, 3*
(1. College ofLife Science, Shanxi University, Taiyuan 030006, China; 2. The Food and Drug Safety Rapid
InspectionCenter, Shanxi University, Taiyuan 030006, China; 3. Shanxi Food and Drug
Administration, Taiyuan 030006, China)
ABSTRACT: With the development of society and the improvement of people'sliving standards, food safety problem
has becomethe focus of the attention. Enzyme-linked immunosorbentassay(ELISA)is a trace detection technology
based on immunology and cell engineering, which is simple and sensitive. In the paper, the research progressofELISA
in analysis of food safetywere reviewed, including the detection of pesticide residues, veterinarydrugresidues,
pathogenic microbes, biological toxin, illegally added inedible substance, heavy metal pollution, allergen, genetically
modified food, etc. The advantages and disadvantagesof ELISA were evaluated, and its futureperspective was also
prospected and suggested.
KEY WORDS: enzyme linked immunosorbent assay;antigen; antibody; foodsafety
1 引 言
食品安全主要包括食品衛(wèi)生安全、食品供應(yīng)質(zhì)量安全
和食品供應(yīng)總量安全[1]。針對食品安全問題, 檢測技術(shù)的
開發(fā)是當(dāng)今迫切需要解決的技術(shù)壁壘[2]。目前常用的食品
安全質(zhì)量檢測技術(shù)包括色譜、質(zhì)譜技術(shù)、光譜分析法、生
物檢測技術(shù)等[3],這些方法檢測時(shí)間長、儀器昂貴、操作復(fù)
雜, 不能滿足快速檢測的要求[4,5]。20 世紀(jì)70 年代, Engval
萬方數(shù)據(jù)
3974 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào) 第7 卷
等[6]建立了酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent
assay, ELISA)定量測定lgG 的方法, 該方法具有干擾性小、
靈敏度高、操作快捷、污染小、安全性高等特點(diǎn), 被廣泛
用于食品安全檢測。ELISA 分類標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一, 但可根據(jù)試
劑來源、標(biāo)本性狀及檢測條件等將現(xiàn)有的檢測技術(shù)分為夾
心法、間接法、競爭法和捕獲法4 種方法[7]。
2 ELISA 在食品安全性指標(biāo)檢測中的應(yīng)用
2.1 農(nóng)藥殘留檢測
每年我國都會(huì)發(fā)生因食用農(nóng)藥殘留超標(biāo)的蔬菜而引
起人畜中毒的事件, 另外在蔬菜的出口貿(mào)易中也存在因農(nóng)
藥殘留超標(biāo)而使貿(mào)易受阻的問題。農(nóng)藥殘留對我國蔬菜產(chǎn)
品的質(zhì)量和人民的飲食安全都有重要的影響[8]。農(nóng)藥殘留
常用的快速檢測方法有酶抑制法和ELISA[9]。果蔬中的有
機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的酶抑制率檢測方法比較成熟,
但需要注意的是, 樣品取樣的規(guī)范操作及取樣部位會(huì)影響
檢測的準(zhǔn)確度, 酶試劑易失活導(dǎo)致反應(yīng)不穩(wěn)定, 檢測結(jié)果
誤差較大, 重復(fù)性差[10]。ELISA 操作步驟簡便, 適用于樣
品量較大的分析篩選,但是ELISA 受限于抗體和抗原制備
和提取[11,12]。
Otieno 等[13]建立了檢測毒死蜱殘留的ELISA 方法,
該方法對于水和沉積物樣本的檢測限(limit of detection,
LOD)是0.37 μg/L 和0.42 μg/kg(干重), 平均回收率和變異
系數(shù)(coefficient of variation, CV) 分別為(96.0±5.8)% 和
(108.0±3.4)%, 與高效液相色譜法相比無顯著差異
(P>0.05) 。Alexandra 等[14] 建立了檢測滴滴涕
(dichlorodiphenyltrichloroethane, DDT)及其相關(guān)化合物的
ELISA 方法, 結(jié)果顯示LOD 是0.06 μg/L, 線性范圍為
0.1~2 μg/L, DDT 相關(guān)化合物的LOD 是0.04 μg/L, 線性范
圍為0.07~1 μg/L。曾俊源等[15]建立了測定桃中氰戊菊酯直
接競爭ELISA 法, 線性范圍為0.01~10 mg/L, 相對標(biāo)準(zhǔn)偏
差(RSD, n=5)為4.5%, IC50 為193 μg/L。在2、0.2 和0.05
mg/kg 添加水平下, 回收率分別為81%~89%、85%~98%和
85%~106%, RSD 分別為5.1%、5.6%和7.7%(n=5), LOD 是
0.014 mg/kg。
2.2 獸藥殘留檢測
獸藥殘留包括獸藥原藥、獸藥在動(dòng)物體內(nèi)的代謝物以
及與獸藥有關(guān)的雜質(zhì)等物質(zhì)[16]。獸藥殘留會(huì)引起中毒, 其
次長期的獸藥殘留會(huì)產(chǎn)生耐藥性的菌株, 從而提高了疾病
治療的難度, 還會(huì)導(dǎo)致過敏反應(yīng), 并影響生態(tài)環(huán)境, 最終
制約畜牧業(yè)的發(fā)展[17]。獸藥殘留常用的方法有微生物法、
儀器分析法[18]。微生物法適用于對畜禽組織中的抗菌藥物
進(jìn)行篩選檢驗(yàn), 該方法雖然能檢測高濃度的殘留, 但是檢
測限高于樣品所規(guī)定的最高殘留限量[19]。建立對獸藥殘留
快速檢測的方法已較為緊迫, ELISA 已經(jīng)成為廣泛應(yīng)用的
快速檢測獸藥殘留的方法[20]。
硝基呋喃類獸藥是一類人工合成的廣譜抗菌藥, 主
要用于預(yù)防和治療由大腸桿菌和沙門氏菌引起的腸道感染,
主要包括呋喃妥因、呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林[21,22]。
李亞楠等[23]建立了檢測動(dòng)物組織中的呋喃妥因代謝物的直
接競爭化學(xué)發(fā)光酶免疫法(chemiluminescent enzyme-linked
immunoassay, CLEIA), 線性檢測范圍為0.030~10.595
ng/mL, IC50 為0.559 ng/mL; 雞肉樣品中的LOD 為0.015
μg/kg; 加標(biāo)回收率為84.9%~103.4%, 批內(nèi)CV 為
3.4%~7.8%, 批間CV 為4.7%~11.8%; 除與呋喃妥因原藥
交叉反應(yīng)率為36.2%, 與其他結(jié)構(gòu)類似物及衍生化試劑交
叉反應(yīng)率均小于0.1%。王瑞等[24]建立了檢測動(dòng)物組織中的
呋喃妥因代謝物的間接競爭CLEIA法, IC50為0.753 ng/mL,
在雞肉組織中的LOD 為0.028 μg/kg, 添加回收率在
80.54%~102.64%之間, CV 均小于10%。李亞楠等[25]建立
了檢測動(dòng)物組織中的呋喃妥因代謝物的直接ELISA 法,線
性方程為Y=-34.723X+158.01(r2=0.9922), 線性檢測范圍為
0.177~11.508 ng/mL, IC50 為1.291 ng/mL; 豬肉、雞肉、魚
肉的LOD 分別為0.115、0.113、0.109 μg/kg, 加標(biāo)回收率
在82.6%~104.7%之間, 批內(nèi)CV 在3.6%~9.3%之間, 批間
CV 在4.3%~12.4%。Liu 等[26]建立了檢測呋喃妥因代謝物
殘留的間接競CLEIA 法, 線性范圍0.03~64 μg/L, LOD 是
0.01 μg/L, 添加回收率為92.1%~107.7%。任海濤等[27]建立
了ELISA 法檢測呋喃西林代謝物, IC50 為12.37 ng/mL, 線
性范圍為0.439~110.78 ng/mL, LOD 為0.07 ng/mL。閆葉娜
[28]建立了檢測呋喃西林代謝物的間接競爭ELISA 法和
CLEIA 法。ELISA 最適檢測范圍為0.1~80 ng/mL, LOD 為
0.03 μg/L, 批內(nèi)CV 和批間CV 分別為2.480%和3.385%,
IC50 為2.19 ng/mL; CLIA 的最適檢測范圍0.1~80
ng/mL,LOD 為0.02 μg/L, IC50 為1.85 ng/mL。李敏等[29]建
立了檢測呋喃唑酮代謝物的間接競爭ELISA 法, 線性范圍
為0.25~10 ng/mg, IC50 為0.5881~1.1333 ng/mL; 此外經(jīng)檢
測與其他類似物的交叉反應(yīng)率, 特異性良好。
直接競爭CLEIA 法的靈敏度和最低檢測限均優(yōu)于間
接競爭CLEIA 法, 與ELISA 法相比, CLEIA 法具有更高的
靈敏度和更低的檢測下限, 其靈敏度比ELISA 法高出一個(gè)
數(shù)量級左右。在操作過程中, CLEIA 法不需要長時(shí)間和較
高溫度的孵育顯色, 加入化學(xué)發(fā)光液后, 室溫避光反應(yīng)4
min 即可檢測。因此, CLEIA 法在檢測時(shí)間、靈敏度及最低
檢測限方面表現(xiàn)出了較大的優(yōu)越性。其中, 直接競爭
CLEIA 法的靈敏度和最低檢測限又優(yōu)于間接競爭CLEIA
法, 因此在實(shí)際檢測和產(chǎn)品試劑盒的研發(fā)中, 優(yōu)先選擇直
接競爭CLEIA 法。
2.3 致病微生物檢測
目前不論是在發(fā)展中國家還是發(fā)達(dá)國家, 對食品安
全影響較大的是致病微生物引起的食源性疾病, 而在人們
萬方數(shù)據(jù)
第10 期 馮 敏, 等: 酶聯(lián)免疫吸附法在食品安全性指標(biāo)檢測中的研究進(jìn)展 3975
食物鏈中, 單增李斯特菌、空腸彎曲菌、沙門氏菌都是重
要的食源性致病菌[30]。伍燕華等[31]建立了檢測沙門氏菌的
雙抗夾心ELISA 法, 該法以抗沙門氏菌多克隆抗體作為捕
獲抗體, 以抗沙門氏菌單克隆抗體C1359 作為檢測抗體,
對A、B、C、D、E5 種典型的沙門氏菌進(jìn)行了檢測, 結(jié)果
表明對沙門氏菌純培養(yǎng)液的最低檢測量為1×104 CFU/mL,
且無交叉反應(yīng)。陳鋼等[32]建立了檢測單增李斯特菌的
ELISA 法, 單核細(xì)胞增生李斯特菌檢測范圍為108~105
CFU/mL, 該研究建立的雙抗夾心檢測方法與金黃色葡萄
球菌和阪崎腸桿菌有較嚴(yán)重的交叉反應(yīng), 而與志賀氏菌和
沙門氏菌交叉反應(yīng)不明顯。李建科等[33]建立了耐熱菌間接
競爭ELISA 快速檢測方法, LOD 為5×104 CFU/mL, 可在
24h 內(nèi)給出果汁中耐熱菌是否超過1 CFU/10 mL 的檢測結(jié)
果, 滿足國內(nèi)外果汁標(biāo)準(zhǔn)中耐熱菌不超過1 CFU/10 mL 的
檢測結(jié)果要求, 檢測時(shí)間比目前國內(nèi)外普遍采用的
KFL(Krueger Food Laboratories)法縮短3~4 d, 檢測結(jié)果與
KFL 法完全相符。
ELISA法由于酶的催化效率很高, 可極大放大反應(yīng)效
果, 使測定方法達(dá)到較高的靈敏度[34]。但是ELISA 法常出
現(xiàn)假陰性結(jié)果, 這可能與所用單克隆抗體的特異性有關(guān),
因此需要設(shè)置陽性和陰性對照試驗(yàn)[35]。ELISA 法與致病菌
傳統(tǒng)檢測法中的分離培養(yǎng)生化鑒定法相比[36], ELISA 檢測
不能作為最后的確證, 因?yàn)閷?shí)際情況樣本分散以及樣本量
不均、監(jiān)管分散, 因此使用快速檢測可以先對樣本進(jìn)行初
步篩選, 先篩選出可疑的樣本, 再對可疑的樣本進(jìn)行分離
培養(yǎng), 從而提高檢測效率[37]。
2.4 生物毒素檢測
檢測生物毒素的方法有薄層層析法、微柱層析法、高
效液相色譜法和毛細(xì)管電泳法等。薄層層析法靈敏度低,
微柱層析法需要用其他的方法進(jìn)行驗(yàn)證, 高效液相色譜
法要求樣品的純度比較高, 樣品的前處理比較繁瑣, 操
作復(fù)雜, 儀器昂貴, 毛細(xì)管電泳成本比較高[38]。近年來出
現(xiàn)了許多新型的檢測新技術(shù), 儀器分析法仍然是實(shí)驗(yàn)室
檢測中最常用的方法。以免疫學(xué)為基礎(chǔ)的方法如ELISA
法由于其具有實(shí)驗(yàn)周期短、設(shè)備簡單、操作簡便等特點(diǎn)而
被廣泛應(yīng)用[39]。
Stachowiak 等[40]建立了檢測黃曲霉毒素B1 直接競爭
ELISA, 通過對單克隆抗體準(zhǔn)確度的實(shí)驗(yàn)確定了兩種單克
隆抗體, IC50 分別是0.037 ng/mL 和0.031 ng/mL。宋曉麗[41]
建立了檢測豬肉和雞肉中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇
(deoxynivaleno, DON)和T-2 毒素的直接競爭ELISA 法, 在
豬肉和雞肉樣本中DON 的LOD 分別為34.9 μg/kg 和43.5
μg/kg, 添加回收率為72.7%~97.1%, CV<8.7%; T-2 毒素的
LOD 分別為33.7 μg/kg 和28.7 μg/kg, 添加回收率為
72.1%~95.0%, CV<11.3%。王呂等[42]建立了基于噬菌體展
示技術(shù)的酶聯(lián)免疫吸附分析檢測赭曲霉毒素A(OTA)的方
法, IC50為(0.15±0.02) ng/mL, 線性范圍為0.03~0.50 ng/mL,
OTA 的LOD 為0.03 ng/mL, 無交叉反應(yīng), 批內(nèi)加標(biāo)回收率
為97.0%~115.2%, 批間加標(biāo)回收率為107.2%~123.1%。
2.5 非法添加的非食用物質(zhì)檢測
ELISA 作為一種經(jīng)濟(jì)快速的檢測方法在食品中違法
添加的非食物質(zhì)檢測中也有應(yīng)用。孫鳳霞[43]利用獲得的單
克隆抗體建立了三聚氰胺的間接競ELISA 法并制備了試
劑盒, IC50 為(6±0.55) ng/mL, 奶粉LOD 為100 μg/kg, 液態(tài)
奶LOD 為20 ng/mL。奶粉樣品和液態(tài)奶樣品的添加回收
率分別為93%~101.9%和83.6%~96.9%, CV<10%, 完全滿
足三聚氰胺殘留檢測的實(shí)際要求。裘雪梅等[44]建立了檢測
蘇丹紅Ⅰ的直接競爭ELISA法, 線性范圍為0.5~10 ng/mL,
LOD 為0.1 ng/mL, 加標(biāo)回收率為52.3%~110%, CV 為
3.2%~8.9%。貢東軍等[45]建立了間接競爭ELISA 法測定堿
性橙Ⅱ的含量, 采用戊二醛法將牛血清蛋白與堿性橙Ⅱ連
接為完全抗原, LOD 為0.01 ng/mL。
2.6 重金屬檢測
重金屬污染不僅能夠改變土壤的組成、功能和結(jié)構(gòu),
而且還會(huì)抑制作物根系生長和光合作用, 影響作物的正常
生長。重金屬還能夠通過食物鏈進(jìn)入人體和動(dòng)已經(jīng)成為物
體內(nèi), 最終危害人體的健康[46]。重金屬難降解和持續(xù)污染
是當(dāng)前重金屬殘留最為關(guān)注的問題, 重金屬的檢測方法主
要有原子吸收光譜法、原子熒光法、陽極溶出伏安法、催
化極譜法和電感耦合等離子體質(zhì)譜法等[47], 這些方法不能
滿足快速檢測的要求, 而酶聯(lián)免疫吸附方法對于重金屬殘
留的檢測具有重要的研究意義[48]。
王津[49]建立了檢測重金屬鎘的間接競爭ELISA 法,
IC50 為4.18 μg/L, LOD 為0.38 μg/L, 除了與金屬汞螯合物
和鉻螯合物分別有10.6%和1.8%的交叉反應(yīng)率外, 與其他
金屬螯合物的交叉反應(yīng)率都小于0.3%。重金屬鎘的平均回
收率為90.54%~115.36%, CV 為1.35%~9.33%。翟一凡[50]
初步建立了Pb2+和Cr3+的間接競爭ELISA, 與其他重金屬
離子的交叉反應(yīng)率均小于1%, LOD 為0.1 ng/mL, IC50 為5
ng/mL。Darwish 等[51]采用一步競爭ELISA(dc-ELISA)對環(huán)
境水樣中的Cd2+進(jìn)行檢測, LOD 為0.3 μg/L, 水中常見的
Ca2+、Mg2+、Fe3+在相對高濃度下對檢測結(jié)果也無干擾。
Cd2+平均回收率為100.29%±3.60%, 批內(nèi)CV 和批間CV 分
別為3.6%~10.9%和4.81%~10.21%。
2.7 過敏原檢測
食品中過敏原已經(jīng)嚴(yán)重危及人們的生活, 這一食品
安全性指標(biāo)也是一個(gè)需要高度關(guān)注的食品營養(yǎng)衛(wèi)生和食
品安全的問題[52]。目前臨床中治療過敏癥的最有效方法
是直接避免食用含有過敏源的食物, 這就要求生產(chǎn)廠家
在食品的標(biāo)簽中直接標(biāo)明食物中存在的過敏原成分, 避
免消費(fèi)者因誤食而導(dǎo)致過敏。避免食物過敏的首要任務(wù)就
萬方數(shù)據(jù)
3976 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào) 第7 卷
是對食物進(jìn)行過敏原檢測[53]。ELISA 已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨
床化學(xué)和食品分析中, 也是檢測食品中過敏原的一種快
速有效的方法[54]。
Shibahara 等[55]建立了對魚過敏原小清蛋白的雙抗夾
心ELISA 法, 這種方法使用抗太平洋鯖魚小清蛋白的多克
隆抗體, LOD 為0.23~0.70 μg/g, 添加回收率為
69.4%~84.8%, RSD<10.5%。Chen 等[56]建立了魚過敏原的
雙抗夾心ELISA 法檢測, LOD 為0.1 μg/g, 該方法的批間
CV 和批內(nèi)CV 分別低于8.9%和9.3%, 該方法無假陽性和
假陰性, 沒有交叉反應(yīng)。張潔瓊等[57]建立了檢測杏仁過敏
原苦杏仁球蛋白的雙抗體夾心ELISA 法, 甜杏仁中苦杏仁
球蛋白的LOD為(6.36±1.02) μg/L; 中國苦杏仁及美國大杏
仁中苦杏仁球蛋白的LOD 分別為(12.11±1.70) μg/L 和
(18.95±1.52) μg/L, 沒有交叉反應(yīng), 苦杏仁球蛋白的添加回
收率為78.94%~125.15%, RSD<5.81%。
ELISA 方法的準(zhǔn)確性和特異性主要依賴于抗體識(shí)別
食物過敏原, 但某些食品工業(yè)常利用熱加工、超高壓和酶
解等深加工技術(shù)使過敏原蛋白發(fā)生變性和降解, 而蛋白質(zhì)
結(jié)構(gòu)的改變又可干擾蛋白提取物或抗體結(jié)合部位, 同時(shí)會(huì)
導(dǎo)致假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。此外, 由于某些過敏原缺少特異
性的單克隆抗體, 無法利用ELISA 法進(jìn)行檢測[58]。
2.8 轉(zhuǎn)基因檢測
顧 煒 煒 等 [59] 建立了用于檢測轉(zhuǎn)基因食品中
Btcry2Ab/2Ac 殺蟲蛋白的直接競爭ELISA, LOD 為40
ng/mL, 線性范圍40~2000 ng/mL, 回收率在
98.52%~102.27%。王新桐等[60]建立了高靈敏度定量檢測轉(zhuǎn)
基因棉花(Gossypium sp.)中新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶(NPTⅡ)雙
抗體夾心ELISA 法, 檢測范圍為3.370~108.125 ng/mL,
LOD 為1.97 ng/mL; 回收率為96.11%~104.69%; CV 為
6.58%~7.33%; 與非轉(zhuǎn)基因棉花內(nèi)源蛋白質(zhì)及其他種類轉(zhuǎn)
基因蛋白質(zhì)均無交叉反應(yīng)。呂雪飛等[61]建立了定量檢測轉(zhuǎn)
基因植物蛋白Cry1Ac 的雙抗體夾心ELISA 法, CV<3%,
LOD 為9.49 ng/mL, 對玉米樣品提取液中Cry1Ac 蛋白含
量的測定回收率為102.5%~103%。
檢測轉(zhuǎn)基因物質(zhì)的雙抗體夾心ELISA 具備多克隆抗
體費(fèi)用較低、單克隆抗體親和力高的特點(diǎn), 使得后續(xù)研究
開發(fā)的試劑盒檢測成本低廉, 靈敏可靠, 而且可以穩(wěn)定、方
便地提供標(biāo)準(zhǔn)化試劑, 便于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。雙抗體夾心
ELISA 檢測方法的研究和建立, 為制備免疫膠體金試紙條
提供了便利, 為建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的現(xiàn)場、快速查驗(yàn)技術(shù)打
下基礎(chǔ), 所以這種檢測方法將成為轉(zhuǎn)基因檢測領(lǐng)域研究的
主要方向之一[62]。
3 結(jié) 論
ELISA 靈敏度高、特異性強(qiáng)、成本低, 設(shè)備簡單, 不
需要專業(yè)的人員操作, 是可以用于實(shí)驗(yàn)室的快速檢測以及
擁有實(shí)驗(yàn)室的其他部門或者企業(yè)進(jìn)行快速檢測。但ELISA
也有不足, 如吸附方法需要一些基礎(chǔ)的儀器如恒溫箱、冰
箱、酶標(biāo)儀等, 因此不適用于基層的現(xiàn)場快速檢測; 基于
酶聯(lián)免疫吸附方法的原理是抗原抗體的特異性結(jié)合, 一些
小分子物質(zhì)需要與牛血清蛋白等大分子蛋白偶聯(lián)之后才有
免疫原性, 但并不是所有的小分子物質(zhì)都能夠制出相應(yīng)的
抗體; 另外, 還需考慮到待測物質(zhì)結(jié)構(gòu)類似物的干擾會(huì)影
響檢測的特異性及靈敏度, 不能滿足同時(shí)檢測多種物質(zhì)的
要求[63]。
隨著蛋白質(zhì)工程和基因工程的發(fā)展, 制備單克隆抗
體的技術(shù)越來越成熟, 會(huì)出現(xiàn)越來越多的ELISA 新技術(shù)。
ELISA 技術(shù)與氣相色譜(gas chromatography,GC)、聚合酶鏈
式反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)等技術(shù)的聯(lián)用, 會(huì)
有效地提高ELISA 技術(shù)的檢測效率[64]。ELISA 法需從以下
幾方面進(jìn)一步完善: (1)研發(fā)具有高度免疫性的重組抗原提
高免疫原性; (2)將酶體外的定向進(jìn)化應(yīng)用到檢測中, 避免
與特異性抗體或抗原的交聯(lián); (3)加強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)化, 促進(jìn)ELISA
相關(guān)快檢產(chǎn)品商品化的應(yīng)用。酶聯(lián)免疫的檢測方法從全手
動(dòng)半自動(dòng)到全自動(dòng)發(fā)展, 目前還不是很成熟, 需進(jìn)一步研
究。隨著對酶聯(lián)免疫吸附方法的研究, 靈敏度、精確度、
特異性、重復(fù)性會(huì)越來越好, 費(fèi)用會(huì)逐步降低, ELISA 在食
品安全檢測方面將會(huì)得到進(jìn)一步發(fā)展。
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(責(zé)任編輯: 姚菲)
作者簡介
馮 敏, 碩士, 主要研究方向?yàn)槭称?
質(zhì)量與安全。
E-mail: 15135101066@163.com
黃登宇, 博士, 副教授, 碩士生導(dǎo)師,
主要研究方向?yàn)槭称沸l(wèi)生檢測。

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